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2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达
作者:张玲  魏绍静  肖春花  钟剑波  陈伟烈  张复春 
单位:广州医学院附属市八人民医院
关键词:2009 H1N1 病毒  MDCK 细胞  神经氨酸酶  原核表达 
分类号:R373.13
出版年,卷(期):页码:2011,11(9):0-997
摘要:
摘要:目的制备2009 H1N1 流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1 快速检测方法和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础。方法采用MDCK 细胞方法分离2009 H1N1 流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR 生成NA 基因,构建原核表达载体PET-102 / D-TOPO-NA,IPTG 诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE 凝胶电泳、Werstern Blotting 鉴定重组蛋白。结果成功分离2009 H1N1 流感病毒,NA 蛋白119、152、275、292 位氨基酸分别为Glu、Arg、His 和Cys。SDS-PAGE。凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64 000,与预期一致。Western Blotting 证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性。结论IPTG 诱导原核表达神经氨酸蛋白的最适浓度为0.1 mmol / L。实验得到的蛋白尚需进一步纯化。
基金项目:
广东省自然科学基金(8151006002000005)
作者简介:
张玲(1985-),女,硕士,研究方向为重大病毒传染病
参考文献:
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